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CIÊNCIA & TECNOLOGIA - Trabalhos Técnicos

Saúde Avicola

Vírus da Bronquite Infecciosa das Galinas e Pneumovírus Aviário Associados com Problemas de Fertilidade em Galos

LYB, Villarreal¹*; PE, Brandão²; JLV, Chacón¹; P, Raffi³; L, Sestak³; AJP, Ferreira¹ ¹ Departamento de Patologia - FMVZ/USP ¹ Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal – FMVZ/USP ³ Cobb-Vantress ∕ Brasil *E. mail: laurav@fmvz.usp.br INTRODUÇÃO A patogenia do vírus da bronquite infecciosa das galinhas – VBIG (Coronaviridae: Coronavirus) do Pneumovirus aviário – PVA (Paramyxoviridae: Metapneumovirus) em doenças reprodutivas em fêmeas deriva-se da replicação em células epiteliais no trato reprodutivo, rico em células ciliadas, resultando em perda dos cílios e degeneração e necrose das células epiteliais e glandulares . Do mesmo modo, o epitélio do ducto eferente dos testículos consiste de células ciliadas e não ciliadas, tornando-os também susceptíveis à replicação VBIG ou do PVA. Embora o VBIG tenha sido hipotetizado como uma das possíveis causas da formação de cálculos no epidídimo, esta correlação ainda não foi comprovada. Este estudo analisou a presença do VBIG e do PVA em testículos de galos em lotes de reprodutores pesados que apresentavam cálculos epididimais e baixa fertilidade. MATERIAL E MÉTODOS Histórico - Amostras de testículos de 6 galos de um lote de 57 semanas de idade apresentando doença respiratória, edema facial, nefrite e diminuição da fertilidade foram recebidas no Laboratório de Ornitopatologia da Universidade de São Paulo para determinar a causa dos problemas reprodutivos. Pesquisa de Bronquite infecciosa das galinhas: Foi realizada através da técnica de RT-PCR visando a amplificação de um fragmento de 179 pb da região 3’UTR do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (1). Pesquisa de Pneumovirus aviário: Foi realizada através de RT-PCR visando a amplificação de fragmentos de 268 pb para o sorotipo A e∕ou 361 pb para o sorotipo B do gene G dos pneumovírus aviários(1). Isolamento viral: Para o isolamento da amostra positiva para o VBIG ou o PVA no PCR, foram utilizados ovos embrionados SPF de 9 dias de idade e inoculados via cavidade alantóide, sendo realizadas 4 passagens. Pesquisa para o gene S do VBIG: Foi realizada através da técnica de RT-PCR visando a amplificação de um fragmento de 706 pb do gene S do VBIG isolado em ovos embrionados. Seqüenciamento e analise filogenética: O fragmento de 706 pb do gene S do VBIG foi submetido ao sequenciamento de DNA e a seqüência obtida foi utilizada para a construção da arvore filogenética, juntamente com seqüências obtidas do Genbank. Histopatologia: As amostras foram fixadas em formol a 10% e coradas com hematoxilina e eosina. RESULTADOS Pesquisa de Bronquite infecciosa das galinhas e Pneumovírus aviário: As amostras de testículos foram positivas para o VBIG e o PVA do sorotipo A. Isolamento viral: Ocorreu a morte embrionária 48 horas após a inoculação, sendo evidentes hemorragia, nanismo e enrolamento dos embriões. Após RT-PCR para o VBIG e o PVA, confirmou-se isolamento apenas de VBIG. Pesquisa para o gene S1 do VBIG: O VBIG isolado em ovos embrionados, testado para o gene S1 apresentou uma banda de aproximadamente 706 pb. Sequenciamento e analise filogenética: A seqüência parcial do gene S1, depositada no Genbank com o codigo IBV/Brazil/2005/USP-01 (número de acceso DQ355995) segregou no mesmo grupo com os genótipos D274, Cal99 e Ark 99, distante dos grupos formados por sorotipos vacinais M41, Ma5, Connecticut, DE072 e 793B. Histopatologia: As lesões encontradas nas amostras de testículos consistiram de infiltração de células plasmáticas, linfócitos e debris celulares ao redor dos túbulos afetados. O epitélio colunar dos túbulos eferentes foi menor que o normal. Foi evidente a presença de cálculos epididimários onde o epitélio estava composto por um envelope fino de células escamosas. Os túbulos seminíferos estavam atróficos e apresentavam uma baixa concentração de espermatozóides viáveis. Outro achado interessante foi que uma porcentagem alta de espermatozóides não apresentavam cauda. DISCUSSÃO E CONCLUSÕES Foram detectados o VBIG e o PVA em testículos de galos apresentando baixa fertilidade. O VBIG detectado nos testículos dos galos foi isolado em ovos embrionados sendo então caracterizado molecularmente como próximo aos genótipos D274, Cal99 e Ark 99 e distante de genótipos vacinais. Lesões microscópicas foram evidentes nos testículos positivos para VBIG e PVA; tais lesões foram encontradas principalmente nos túbulos seminíferos e no epidídimo, e uma vez que o epidídimo está diretamente relacionado com a produção de esperma fértil, qualquer alteração nesta região pode levar a problemas de fertilidade. Sugere-se que as amostras de VBIG e PVA detectadas estão diretamente relacionados com as lesões encontradas nos testículos, uma vez que estes vírus apresentam afinidade pelo epitélio ciliado do trato reprodutivo da fêmea, características também encontradas no trato reprodutivo do macho. Outros estudos são necessários para demonstrar o papel do VBIG e do PVA nos problemas de fertilidade relatados nos machos reprodutores. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.Cavanagh D, Mawditt K, Welchman D de B, P.Britton P, Gough RE. Avian Pathology 2002; 31:81-93. 2 Cavanagh D, Mawditt K, Britton P, Naylor CJ. Avian Pathology 1999; 28:593-605.


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